賽默飛QuantStudio 6 Pro實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)需要定期校準(zhǔn)溫度。這是保證定量數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和孔間一致性的必要維護(hù)操作。

一、為什么需要校準(zhǔn)？

1、QuantStudio 6 Pro的溫控模塊（Peltier元件）長期使用后可能出現(xiàn)邊緣與中心的溫度偏差，導(dǎo)致不同孔的Ct值偏移、擴(kuò)增效率不一致。

2、溫度不準(zhǔn)會(huì)直接影響熔解曲線分析（Tm值漂移）和絕對定量結(jié)果。

3、要求：溫度校準(zhǔn)通常每12個(gè)月一次，如果儀器使用頻繁（每天>2次）或環(huán)境溫度波動(dòng)大，建議縮短至6-8個(gè)月。

二、校準(zhǔn)內(nèi)容包括什么？

QuantStudio 6 Pro的校準(zhǔn)分為兩部分，溫度是其中之一：

1、溫度校準(zhǔn)

目的：驗(yàn)證并修正模塊各孔的實(shí)際溫度與設(shè)定值的偏差

所需工具：專用溫度校準(zhǔn)板（含熱敏電阻或熒光溫度探針，貨號：4458936）

2、光學(xué)校準(zhǔn)

目的：校正激發(fā)光/檢測光路（FAM, VIC, ROX, CY5等通道）

所需試劑：光學(xué)校準(zhǔn)板（含6種染料，貨號：4458937）

三、校準(zhǔn)操作方式

1、用戶自行校準(zhǔn)（推薦有經(jīng)驗(yàn)者）

（1）從賽默飛下載QuantStudio 6 Pro校準(zhǔn)套件（包括溫度校準(zhǔn)板+軟件）。

（2）在儀器觸摸屏上進(jìn)入 Maintenance → Perform Calibration → Temperature Verification。

（3）按向?qū)Х湃雽Ｓ冒澹\(yùn)行約30分鐘，軟件自動(dòng)生成偏差報(bào)告。若偏差超過±0.5℃，需要執(zhí)行溫度校正（需輸入管理員密碼）。

（4）注意：溫度校正需要參考溫度計(jì)模塊（部分套件包含），否則只能驗(yàn)證無法修正。

2、聯(lián)系工程師

（1）賽默飛提供年度預(yù)防性維護(hù)（PM），包含溫度+光學(xué)校準(zhǔn)、系統(tǒng)檢測、清潔。價(jià)格約3000-5000元/次。

（2）如果自行校準(zhǔn)失敗（如偏差>1.5℃），可能需更換加熱模塊，費(fèi)用約1.2-1.8萬元。

四、如何判斷是否需要緊急校準(zhǔn)？

出現(xiàn)以下現(xiàn)象時(shí)，即使未到周期也建議立即校準(zhǔn)：

1、同一份樣本在不同孔位的Ct值差異 >0.5（正常應(yīng)<0.25）。

2、熔解曲線的主峰Tm值偏移超過±1℃（例如陽性對照從85℃變成86.5℃）。

3、陰性對照出現(xiàn)非特異擴(kuò)增（可能因孔間溫度不均導(dǎo)致引物二聚體）。

4、儀器自檢報(bào)錯(cuò)：“Temperature uniformity out of spec"或“Block calibration required"。

五、實(shí)用建議

1、購買校準(zhǔn)套件備用：如果實(shí)驗(yàn)室有多臺QuantStudio系列（如3、5、6 Pro、7 Pro），可以共用一套校準(zhǔn)板（貨號相同），單次成本約2500元。

2、記錄校準(zhǔn)歷史：在儀器日志中記錄每次校準(zhǔn)日期、偏差值、操作人。賽默飛軟件導(dǎo)出報(bào)告中包含校準(zhǔn)數(shù)據(jù)。

3、日常驗(yàn)證替代方法：若暫無校準(zhǔn)條件，可使用第三方溫度驗(yàn)證試劑盒（例如ROX染料標(biāo)定法，如Thermo Scientific #4458941）快速判斷是否需要校準(zhǔn)。

六、結(jié)論

1、定期校準(zhǔn)，推薦每年一次。

2、高頻率使用或?qū)Χ烤纫蟾叩膶?shí)驗(yàn)（如<1.5倍差異的基因表達(dá)），建議每6個(gè)月校準(zhǔn)一次。

3、自行校準(zhǔn)需購買專用套件并仔細(xì)閱讀手冊；否則直接聯(lián)系賽默飛售后服務(wù)。