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賽默飛NanoDrop Ultra在特定波長無法測量,通常是由基座污染、空白校正不當、樣品問題或硬件故障引起的。建議按照以下順序進行排查:
一、清潔基座
這是常見的原因,殘留的樣品會嚴重干擾特定波長的光吸收。
1、正確操作:使用柔軟的無塵布(如Kimwipes),蘸取去離子水或70%乙醇,單向擦拭上下兩個光學基座,然后讓其自然晾干。
2、驗證效果:清潔后,滴加2µL空白液并執行“Blank"校正。如果此時A260讀數大于0.04A,或曲線依然不平滑,說明基座可能仍有污染。
二、檢查空白與樣品
1、空白校正(Blank):確保每次實驗或更換緩沖液后,都使用與樣品一致的溶劑進行空白校正。
2、樣品狀態:確保樣品均一、無氣泡。上機前可將樣品短暫離心,去除氣泡和顆粒。
三、檢查軟件設置與系統狀態
1、選擇正確的應用:在軟件中確認已選擇正確的測量類型(如“核酸"、“蛋白質A280"等)。如果使用“自定義"模式,請檢查是否已正確添加了需要測量的波長。
2、運行診斷程序:運行儀器內置的“強度檢測 (Intensity Check)"或使用PV-1性能驗證試劑盒進行驗證。如果結果為“Fail",則強烈提示硬件問題。
3、重啟儀器:關閉儀器電源,等待至少60秒后再重新開機,以清除臨時緩存和系統錯誤。
四、排查硬件故障
如果以上步驟均無效,問題可能出在硬件上:
1、光源老化:尤其表現為紫外區(如260nm附近)噪音增大。
2、光路組件:如光纖或光路組件污染或損壞。
3、檢測器或主板:檢測器靈敏度下降或主板電路故障。